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[BA202400144]人参益元颗粒对化疗后免疫功能低下大鼠及Lewis荷瘤小鼠瘤体生长和免疫功能的影响（测试加工服务）备案公示公告(更正)
发布时间：*开通会员可解锁* 11:33:49
采购信息
| 项目编号 | BA202400144 | 项目名称 | 人参益元颗粒对化疗后免疫功能低下大鼠及Lewis荷瘤小鼠瘤体生长和免疫功能的影响（测试加工服务） |
|---|---|---|---|
| 经办人单位 | 第一医院（白求恩第一临床医学院） | 经办人 | 吴荻 |
| 预算金额 | 123000.00 人民币 | 成交金额 | 123000.00 人民币 |
| 成交供应商 | 吉林省中医药科学院 | 质保期 | 24 月 |
| 联系地址 | 吉林省-长春市-经济技术开发区自由大路6426号 | 采购单位 | 吉林大学第一医院（白求恩第一临床医学院） |
| 付款方式 | 服务完毕验收合格后100%付款。 | ||
| 供应商联系手机 | *开通会员可解锁* | 服务时间 | *开通会员可解锁* |
| 服务地址 | 吉林省-长春市-经济技术开发区自由大路6426号 | ||
| 验收方式 | 以成交单为准，参考相关内容进行验收。验收程序以甲方职能部门规定为准。 | ||
| 售后服务要求 | 1.在提供实验室服务后，吉林省中医药科学院应根据我方要求，真实、及时的进行试验并出具试验报告，应确保实验结果的准确性和可靠性。 2.根据现行有效标准、规程、规范及进度进行检测。并对检测数据及检测报告负责，如果我方对实验结果存在异议，及时向吉林省中医药科学院提出，吉林省中医药科学院应积极处理并提供解决方案。 3.吉林省中医药科学院应保持对我方提供的实验方案和相关信息的保密，不得向任何第三方披露或泄露。除非获得我方书面同意或法律法规另有规定。 | ||
明细清单
| 采购品目 | 其他研究和试验开发服务 | 名称 | 测试加工费 |
|---|---|---|---|
| 单位 | 项 | 数量 | 1 |
| 单价 | ¥123,000.00 | 总价 | ¥123,000.00 |
| 范围/服务内容及要求 | 实验一 （一）研究内容 观察人参益元颗粒对Lewis荷瘤小鼠瘤体生长和免疫功能的影响。 成人每日14g（小鼠：12.33*14g/60kg=2.88g/kg） （二）研究方法 1. 实验材料 1.1实验细胞 实验细胞采用小鼠Lewis肺癌细胞细胞株。细胞株使用含10%胎牛血清和1%青链霉素的高糖 DMEM培养基，在5%CO2、37℃条件下培养，稳定传代至4-5代备用。 1.2实验动物 实验动物购自于北京维通利华实验动物技术有限公司，采用8周龄C57BL/6J雌性小鼠，55只，体重18-20g。 2实验方法 2.1皮下接种 用PBS将Lewis细胞制备成细胞悬液，根据预实验调整细胞悬液浓度至指定浓度（在5×106 /mL上下选择，需要根据预实验结果判定该批细胞株增殖活性）。 在超净台上操作，用75%酒精消毒C57BL/6小鼠右腋窝部皮肤，准备细胞接种注射前使用移液枪将预先配制好的细胞悬液充分吹散，用注射器吸取Lewis肺癌细胞细胞悬液0.2mL，针头轻轻刺入皮下，推入肿瘤细胞悬液。 2.2人参益元药液配制 本研究使用的人参益元颗粒由吉林省中医药科学院制剂室提供，药物组成：黄人参、黄芪、佛手、白芍、鸡血藤、甘草，规格：每袋装10g，一次1袋，一日1次。称量2.88g，蒸馏水定容至10mL。 2.3动物分组及干预 随机选取10只小鼠作为空白对照组，其余小鼠接种Lewis细胞，接种后1周，检查小鼠成瘤情况，用手指轻轻触摸小鼠右侧腋下皮肤，若接种成功则可触及约黄豆粒大小的结节。选取造模成功的荷瘤小鼠40只，按体质量随机分为4组(每组10只)：中药组、顺铂组、中药联合顺铂组(中西药组)和模型组。从接种后第8天开始，给予荷瘤小鼠相应药物干预： ①对照组：按10mL/kg每日灌服蒸馏水，连续灌胃21天，并从第1天开始隔天腹腔注射生理盐水0.4ml； ②模型组：按10mL/kg每日灌服蒸馏水，连续灌胃21天，并从第1天开始隔天腹腔注射生理盐水0.4ml； ③顺铂组：从第1天开始，隔天腹腔注射顺铂注射液0.4ml(浓度2mg/kg)，共注射10次，同时按10mL/kg每日灌服蒸馏水21天； ④中药组：从第1天开始每日灌胃人参益元颗粒10mL/kg，连续灌胃21天，并隔天腹腔注射生理盐水0.4ml，共注射10次； ⑤中西药组：按照人参益元颗粒10mL/kg每日连续灌胃21天，同时隔天腹腔注射顺铂注射液0.4ml,共10次。 3.观测指标 3.1一般观察和体重 每天检查小鼠的体重和一般情况，包括行为、皮毛状态、食物摄入量和排便情况。 3.2瘤体体积测量 分别于干预周期的第1、4、7、10、14、20天，用电子游标卡尺测量各组小鼠皮下肿瘤的长径和短径，根据长径(a)和短径(b)来计算肿瘤体积，计算公式为：V(cm3)=ab²/2,以干预天数为横轴，小鼠肿瘤体积为纵轴，绘制各组小鼠的肿瘤生长曲线。（每组10只） 3.3肿瘤组织HE染色 将各组小鼠皮下移植瘤剥离后制成组织切片，采用ＨE染色方法对肿瘤组织 进行染色，以观察其组织细胞形态。（每组三只，切片做全扫描） 3.4计算抑瘤率 各组进行干预21天后脱颈椎处死小鼠，完整剥取小鼠右侧腋部肿瘤组织，滤纸吸干瘤体表面后立即采用精密电子天平称取肿瘤质量，并进行瘤体拍照。根据肿瘤质量计算各组抑瘤率，抑瘤率=(模型组平均瘤质量一药物干预组平均瘤质量)/模型组平均瘤质量×100%。（每组10只） 3.5外周血和淋巴细胞(PBMC)的测定 给药21天后，取小鼠眼窝静脉血样。用全自动血液分析仪检测白细胞(WBC)、血小板(PLT)、红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)及淋巴细胞(PBMC)。（每组5只） 3.6免疫器官指数 处死小鼠前先进行眼球采血，眼球采血后处死小鼠，尽量完整摘取胸腺及脾脏，冲洗并用滤纸吸干水分后称重。胸腺及脾脏指数计算公式：胸腺指数=(胸腺重量(mg)×1000)/小鼠体重(g)，脾脏指数=(脾脏重量(mg)×1000)/小鼠体重(g)。（每组10只） 3.7 免疫相关指标检测 流式细胞仪检测脾脏中CD4+、CD8+以及CD4／CD8水平；（每组3只） ELISA法检测外周血和脾脏中相肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及干扰素－γ(IFN-γ) 含量。（每组5只） 费用： 测试加工费：75000 实验二 1、人参益元颗粒在小鼠体内对放化疗所致的免疫功能低下的拮抗作用 雄性SD大鼠40只，随机分为正常对照组、模型对照组及人参益元颗粒低、中、高剂量干预组共5组，每组8只，称重并标记。 （1）免疫低下模型建立：实验第1d至第7d，模型组及各治疗组采用腹腔注射20mg/mL 的CTX注射液，按40mg/kg，首次加倍，隔天1次，连续4次的造模方法，正常对照组用等体积的生理盐水代替。 （2）动物给药：第1d至第21d，药物治疗组在免疫抑制同时分别给予不同剂量人参益元药液灌服，高剂量组2.88g/kg，中剂量组1.44 g/kg ，低剂量组0.72 g/kg ，灌胃体积均为10 mL/kg ，灌胃1次/日，正常对照组和模型组大鼠每天予等量蒸馏水灌胃。 （3）检测指标。 ①流式细胞术检测外周血中CD3+、CD4+；（每组8只） ②ELISA法检测外周血相关免疫细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及干扰素-γ(IFN-γ) 含量；（每组8只） ③Western blot 检测脾组织TNF-α蛋白的表达；（每组3只） ④外周血淋巴细胞(PBMC)的测定全自动血液分析仪检测白细胞(WBC)、血小板(PLT)、红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)及淋巴细胞(PBMC)。（每组8只） 费用： 测试加工费：48000 实验结果以报告形式提供，提供所试剂仪器等信息，数据形成表格以及PRISM软件绘制的柱状图，病理图等，可提供分析软件的文件，用以后期自由调整结题材料和论文的图信息。 | ||
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